OD值在ELISA中的作用

OD值（光密度值）是ELISA檢測中通過酶標儀測定的吸光度指標，直接反映樣本中目標物質的含量。其核心作用包括：

?定量分析基礎?：OD值與目標物濃度呈正相關，濃度越高，OD值越大。

?結果判讀依據(jù)?：通過對比樣品OD值與臨界值（如S/CO值）判斷陰陽性。

?標準曲線計算?：標準曲線將OD值轉換為具體濃度，需通過四參數(shù)邏輯斯蒂等模型擬合。

影響ELISA OD值的常見因素

?樣本處理?

樣本收集、保存不當（如反復凍融）可能影響待測物穩(wěn)定性。

溶血、脂濁、類風濕因子等干擾物質會導致假陽性或假陰性。

?試劑質量?

抗體特異性、親和力不足會降低靈敏度或導致假陽性。

酶底物系統(tǒng)配制錯誤或保存不當會顯色異常?。

?操作技術?

?加樣準確性?：未校準的移液器或加樣速度不一致導致孔間體積差異?。

?洗滌技術?：洗滌不導致背景偏高，或過度洗滌破壞抗原-抗體結合?。

?孵育條件?：溫度波動、時間不足或未使用封板膜影響反應效率?。

?儀器與環(huán)境?

酶標儀未校準或波長錯誤（如未使用450nm）導致讀數(shù)偏差?。

陽光直射、溫度波動等環(huán)境因素干擾顯色反應?。

?標準曲線優(yōu)化?

標準品溶解不充分、稀釋未混勻或加樣不精確導致曲線擬合度差（R2<0.99）?。

優(yōu)化OD值讀數(shù)的關鍵措施

?嚴格操作規(guī)范?

加樣時保持垂直，避免氣泡，定期校準移液器?。

洗滌4-5次，每孔250μL，拍干而非過度拍打?。

?質量控制?

使用空白孔和陰性對照監(jiān)控背景信號?。

分批操作減少操作時差，避免顯色時間不足或過長?。

?樣本與試劑優(yōu)化?

避免溶血樣本，必要時測定血紅蛋白含量（≤5g/L）。

選擇高靈敏度試劑盒，確保抗體稀釋正確?。