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如何避免PCR產物的反復凍融

點擊次數:26 更新時間:2025-12-08
 

     避免PCR產物反復凍融,有效的方法是?按單次使用量分裝保存?。將PCR產物分裝到低吸附離心管中,每管預留10%體積,標記好日期和濃度,采用“先存先用"原則。這樣每次只需取用所需量,避免反復凍融整個樣本。

?其他關鍵措施包括:?

?添加保護劑?:在PCR產物中加入5%-10%甘油或0.1mM EDTA,能緩沖凍融過程中的物理損傷并抑制核酸酶活性。

?優化保存溫度?:短期存放(1-2天內)可置于4℃;長期保存(數月)應置于-80℃。若需頻繁使用,可短期存放于4℃(不超過72小時)。

?嚴格質量控制?:每次凍融后建議通過電泳檢測完整性,若出現條帶彌散或OD260/280比值異常(>1.9),需重新擴增樣本。


 
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